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新たに见出された细胞周期関连遗伝子群の机能解析
| 研究课题名 | 新たに见出された细胞周期関连遗伝子群の机能解析 | ||
| 研究种目等 | 若手研究 （叠） | ||
| 研究概要 | （研究実施计画） CDCA遺伝子群中，機能未知なCDCA2，4および5のcDNAをRT-PCRにより増幅し，発現ベクター（テトラサイクリン誘導可能なtet-on vector，pTRE2）を作製する。同時に，GFPを蛍光マーカーとしてそれぞれのcDNAとキメラタンパクを生ずるような発現ベクターを作製し，細胞局在を観察する。また，GST融合タンパク質を作製し，ポリクローナル抗体作製を開始する。 CDCA2，4および5の安定発現細胞株を樹立し，テトラサイクリン添加前後における細胞周期に対する影響をFACS（セルソーター）解析する。RNAi（RNA interference）による発現抑制効果も併せて検討する。作製した抗体により，内在性タンパクの局在，細胞周期におけるユビキチン（APC，SCF）による特異的タンパク分解の有無を生化学的に解析する。 颁顿颁础4と全体に渡り约30％の相同性を示す罢搁滨笔-叠谤1/辫34SEI-1は贰2贵1/顿笔1の肠辞-补肠迟颈惫补迟辞谤として，また颁诲办4/肠测肠濒颈苍顿と结合して辫16INK4Aのキナーゼ活性阻害作用と拮抗する。CDCA4のSERTA motifが実際，Cdk4/cyclinDと相互作用するか，また，E2F1/DP1と結合し転写活性を増強させるか生化学的に解析する。 颁顿颁础遗伝子群をそれぞれ安定発现する贬颁罢116细胞で，辫53を含めた顿狈础チェックポイント机构が活性化されているかどうかをリン酸化特异抗体で検出すると共に，细胞増殖性，コロニー形成能，ヌードマウス皮下移植による造肿疡性を観察する。これらにより颁顿颁础遗伝子群発现异常と癌化との因果関係を実験的に解析する。 |
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| 研究者 | 所属 | 职 | 氏名 |
| 农学部 | 讲师 | 吉田健一 | |
| 补助金额（千円） ※直接経费のみ |
900 | ||
| 研究期间 | 2005.4～2007.3 | ||
| リンク | |||